Post by mackenzie on Aug 2, 2023 0:29:10 GMT -5
孔中。将蛋白质转移到硝酸纤维素滤膜上。如之白质印迹。35使用以下一抗β-肌动蛋白嘌呤霉素（1:100，密理博，MABE343）；标志。荧光标记二抗购自 Abcam（1:10,000，Abcam）。 伤口愈合检测 NSun2 siRNA 或对照 siRNA 转染至 HL-7702 细胞中。24小时后，将细胞暴露于H 2 O 2 (10 μM)，再培养24小时，
然后进行伤口愈合测定。伤口愈合测定按照同上的培亚洲手机号码列表养物插入2孔的说明（同上，80209）进行。简而言之，用丝裂霉素C处理细胞2小时以抑制细胞增殖。去除死细胞和干净的细胞碎片。将细胞消化并计数。然后制备细胞悬液，并将 70 μL 添加到每个孔中（当细胞大约 100% 汇合时），同时避免摇动。细胞在5% CO 2下孵育37°C，使
匀浆并在4℃下离心和 12,000 × g 10 分钟。对于体外培养的细胞，将含有蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液添加到培养皿中以提取培养皿中的细胞蛋白。将细胞层划伤并转移至Eppendorf管中。将细胞在冰中裂解 30 分钟，然后在 4 °C 和 12,000 × g下离心。使用 Pierce BCA 蛋白质测定试剂盒（Thermo Fisher）测定蛋白质浓度。通过 SDS-PAGE 分离蛋白质。将等量的蛋白质添加到凝胶的每个